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博萊霉素溶液的配制方法來了解下
點擊次數(shù):8357 更新時間:2020-05-27
   博萊霉素是分子生物學中常用的真核抗生素,同時又可以用于大腸桿菌篩選。
  在使用帶有bleo或Zeocin R篩選標記的載體DNA轉染或轉化細胞時,向培養(yǎng)基加入Zeocin可以殺死沒有被轉染的細胞,篩選出陽性轉染或轉化的細胞。
  博萊霉素應用領域:
  可選擇Sh ble基因表達的細胞。與現(xiàn)在使用的其他動物細胞標記物無交叉抗性
  因此這種抗生素可用來分離對其他篩選劑(如:慶大霉素,潮霉素)有抗性的克隆。Zeocin是一種屬于爭光霉素家族的糖蛋白抗生素,在體內(nèi)能作用于大多數(shù)細菌(包括E. coli)、真菌(如:酵母菌)、植物細胞、動物細胞。
  博萊霉素溶液的配制方法:
  1. 先將使用到的所有器具高溫滅菌,儀器表面、工作臺面消毒。
  2. 在分析天平上稱取博萊霉素粉末0.500 g,加10 mL無菌水溶液溶解。
  3. 用0.2微米濾膜過濾除菌到無菌容器中,然后分裝到 1.5 mL EP管中。
  不建議使用螺旋蓋管子,容易污染。-20度保存。
  為避免污染和反復凍融,建議分裝成小規(guī)格的,如500 uL。
  博萊霉素使用辦法:
  1、液體Zeocin可用于細胞培養(yǎng)。
  2、用于篩選轉化株的Zeocin濃度根據(jù)PH值和鹽濃度改變。
  3、PH越高,鹽濃度越低Zeocin活性越大。
  4、普通大腸桿菌菌株篩選可在25 ?g/ml zeocin濃度的低鹽LB瓊脂培養(yǎng)基中進行,PH調(diào)至7.5 。
  5、動物細胞篩選:根據(jù)不同細胞系從100 到 750 ?g/ml 。
  6、植物細胞篩選:根據(jù)不同的細胞種類和培養(yǎng)基從50 到 250 ?g/ml 。
  7、酵母篩選:取決于種屬和培養(yǎng)基,S. cerevisiae Sh ble轉化株在50 ?g/ml 濃度的YPD培養(yǎng)基中篩選,PH7.0. 304015

滬公網(wǎng)安備 31011802001678號

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