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CCK-8試劑盒實(shí)驗(yàn)原理和操作步驟詳解
更新時(shí)間:2019-09-17 點(diǎn)擊次數(shù):10949次
   CCK-8試劑盒實(shí)驗(yàn)原理和操作步驟詳解
  Cell Counting Kit-8簡(jiǎn)稱CCK-8試劑盒,是一種基于WST-8(化學(xué)名:2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽),CCK-8試劑盒適用于細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性的快速高靈敏度檢測(cè)試劑盒。
  CCK-8試劑盒實(shí)驗(yàn)原理:
  WST-8屬于MTT的升級(jí)產(chǎn)品,在電子耦合試劑存在的情況下,可以被線粒體內(nèi)的脫氫酶還原生成高度水溶性的橙黃色的甲臜產(chǎn)物(formazan)。顏色的深淺與細(xì)胞的增殖成正比,與細(xì)胞毒性成反比。使用酶標(biāo)儀在450mM波長(zhǎng)處測(cè)定OD值,間接反映活細(xì)胞數(shù)量。
  CCK-8試劑盒用途:
  CCK-8法應(yīng)用非常廣泛,如藥物篩選、細(xì)胞增  殖測(cè)定、細(xì)胞毒性測(cè)定、腫瘤藥敏試驗(yàn)以及生物因子的活性檢測(cè)等。
  CCK-8試劑盒用于藥物篩選、細(xì)胞增殖測(cè)定、細(xì)胞毒性測(cè)定、腫瘤藥敏試驗(yàn)。那么用于細(xì)胞毒性測(cè)定的操作步驟是什么呢?
  方法/步驟1:
  在96孔板中配制100μl 的細(xì)胞懸液。將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱預(yù)培養(yǎng) 24 小時(shí) (在 37℃,5% CO2 的條件下)。
  方法/步驟2:
  向培養(yǎng)板加入 10μl 不同濃度的待測(cè)物質(zhì)。
  方法/步驟3:
  將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱孵育一段適當(dāng)?shù)臅r(shí)間 (例如: 6,12, 24 或 48 小時(shí))。
  方法/步驟4:
  向每孔加入 10μl CCK8 溶液(Engreen) (注意不要在孔中生成氣泡,它們會(huì)影響 OD 值的讀數(shù))。
  方法/步驟5:
  將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育 1-4 小時(shí)。
  方法/步驟6:
  用酶標(biāo)儀測(cè)定在 450 nm 處的吸光度。
  方法/步驟7:
  如果暫時(shí)不測(cè)定OD值,打算以后測(cè)定的話,可以向每孔中加入10μl 0.1 M HCl溶液或者1%w/vSDS 溶液,并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。在24小時(shí)內(nèi)吸光度不會(huì)發(fā)生變化。
  以上就是CCK-8試劑盒的相關(guān)使用說明,以供參考!

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