執(zhí)照.jpg)
BL21(DE3)感受態(tài)細胞說明書
BL21(DE3) Competent Cell
BL21(DE3)感受態(tài)細胞
目錄號：YJ0809
保存條件：-80℃保存。
組分說明
Cat. No. YJ0809A
Size 10×100 μl
BL21(DE3) Competent Cell 10×100 μl
Control DNA pUC19，0.1 ng/μl 10 μl
產品簡介
本產品是大腸桿菌 BL21(DE3)菌株經特殊工藝處理得到的感受態(tài)細胞，可用于
DNA的熱擊轉化。BL21(DE3)菌株適合表達非毒性蛋白，該菌株是以T7 RNA聚合酶為
表達系統的外源基因蛋白表達的宿主。T7噬菌體RNA聚合酶基因的表達受λ噬菌體
DE3區(qū)的lacUV5啟動子調控，該區(qū)整合在BL21染色體上。使用pUC19質粒檢測，轉化
效率可達10 7
本產品僅供科研使用，請勿用于臨床診斷及其他用途
注意事項
1．感受態(tài)細胞一定要用干冰運輸。感受態(tài)細胞應在 -80℃下保存，不可多次凍融和放
置時間過長，以免降低感受態(tài)細胞的轉化效率。
2．轉化所有步驟均在無菌條件下操作。
3．包裝中有0.1 ng/μl的pUC19DNA，供對照試驗使用。
操作步驟
1．取感受態(tài)細胞置于冰浴中。一次轉化感受態(tài)細胞的建議用量為50-100 μl，可以根據實際情況分裝使用。
以下實驗以50 μl感受態(tài)細胞為例。
2．待感受態(tài)細胞融化后，向感受態(tài)細胞懸液中加入目的DNA（根據實際情況加入適量
的DNA，通常100 μl感受態(tài)細胞能夠被1 ng超螺旋質粒DNA所飽和），用移液器輕輕吹打混勻，冰浴30分鐘。
3．42℃熱擊45秒，迅速將離心管轉移到冰浴中，冰上靜置2-3分鐘。
4．每個離心管中加入450 μl無菌的SOC或LB培養(yǎng)基（不含抗生素），混勻后置于37℃搖床，150 rpm振蕩培養(yǎng)45分鐘使菌體復蘇。
5．根據實驗需求，取適量已轉化的感受態(tài)細胞，加到含相應抗生素的 SOC或LB固體瓊脂培養(yǎng)基上，用無菌的涂布棒將細胞均勻涂開，將平板置于37℃直至液體被吸收，
倒置培養(yǎng)，37℃培養(yǎng)12-16小時。
注意：1）涂布用量可根據具體實驗調整。若轉化的DNA總量較多，可取少量轉化產物涂布平板；若轉化的DNA總量較少，可取200-300 μl轉化產物涂布平板。若預計的克隆數較少，可通過離心（4,000 rpm，2分鐘）后吸除部分培養(yǎng)液，懸浮菌體后將其涂布于平板中。
2）新制備的固體培養(yǎng)基不易涂干，可將平板正置于37℃直至液體被吸收后再倒置培養(yǎng)。
3）涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的轉化菌落數過少，可以將剩下的菌液再涂布新培養(yǎng)基進行培養(yǎng)。
