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細(xì)胞生長曲線的測定
細(xì)胞生長曲線的測定
更新時(shí)間:2024-12-31
型    號:
所屬分類:細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)
報(bào)    價(jià):300
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提供商: 上海研謹(jǐn)生物
服務(wù)名稱: 細(xì)胞生長曲線的測定
規(guī)格: 細(xì)胞生長曲線的測定
價(jià)格: 300元
收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)/服務(wù)周期/提供結(jié)果:
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細(xì)胞生長曲線的測定產(chǎn)品概述:

細(xì)胞生長曲線的測定實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/span>

掌握繪制細(xì)胞生長曲線的原理和方法。

細(xì)胞生長曲線的測定背景與原理

生長曲線是測定細(xì)胞生長數(shù)的常用方法,也是判定細(xì)胞活力的重要指標(biāo),是培養(yǎng)細(xì)胞生物學(xué)特性的基本參數(shù)之一。--般細(xì)胞傳代之后,經(jīng)過短暫的懸浮后貼壁,隨后渡過長短不同的潛伏期,即進(jìn)入快速生長的指數(shù)生長期。在細(xì)胞達(dá)到飽和密度后,停止生長,進(jìn)入平臺(tái)期,然后退化衰亡。為了準(zhǔn)確描述整個(gè)過程中細(xì)胞數(shù)目的動(dòng)態(tài)變化,需連續(xù)對細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)。通常計(jì)數(shù)6天。為精確起見,一般每次實(shí)驗(yàn)設(shè)3個(gè)平行重復(fù)。

[材料、試劑與儀器]

1、實(shí)驗(yàn)材料:

Hela細(xì)胞系。

2、實(shí)驗(yàn)試劑:

DMEM培養(yǎng)基(青霉素,鏈霉素,10%血清) ,0.25%胰蛋白酶溶液, 臺(tái)酚藍(lán)染液。

3、實(shí)驗(yàn)儀器:

超凈工作臺(tái),CO2培養(yǎng)箱,倒置顯微鏡,微量移液器,血細(xì)胞計(jì)數(shù)板,培養(yǎng)瓶,離心管,移液管,廢液缸,蓋玻片, 24孔板。

[方法與步驟]

1、取生長良好的細(xì)胞,用培養(yǎng)基制成細(xì)胞懸液后計(jì)數(shù)。根據(jù)細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果按5x104/mL作傳代培養(yǎng)接種于24孔板中,共接種21孔細(xì)胞。1 m/孔。余下三孔可設(shè)傳代培養(yǎng)的對照。

2、24h后每天記錄細(xì)胞數(shù)目,每次取3孔細(xì)胞,分別進(jìn)行計(jì)數(shù)。計(jì)算平均值。連續(xù)計(jì)數(shù)7d。細(xì)胞用胰酶消化后加入一定量的培養(yǎng)基,混勻制成細(xì)胞懸液。取少量懸液與臺(tái)酚藍(lán)1:1混臺(tái)。取一干凈的血細(xì)胞計(jì)數(shù)板,蓋上蓋片,從蓋片兩邊滴入細(xì)胞懸液使之充滿計(jì)數(shù)板和蓋片之間。注意滴液勿有氣泡,也不能太多,否則會(huì)使蓋片浮起而使細(xì)胞計(jì)數(shù)不準(zhǔn)。

3、低倍鏡下觀察,活細(xì)胞不著色,臺(tái)盼藍(lán)著色的細(xì)胞呈深藍(lán)色,是不健康或已死亡的細(xì)胞,不能計(jì)數(shù)。

找出計(jì)數(shù)板上的方格,計(jì)算四角大格內(nèi)總細(xì)胞數(shù),大格線者只計(jì)左側(cè)和上方,不計(jì)右側(cè)和下方細(xì)胞懸液中細(xì)胞

密度計(jì)算公式為:細(xì)胞數(shù)/mL= (四角大格內(nèi)細(xì)胞數(shù)/4) x104x2

4、根據(jù)細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果,以單位細(xì)胞數(shù)(細(xì)胞數(shù)/mL)為縱坐標(biāo),以時(shí)間為橫坐標(biāo)繪制生長曲線。

 

 

部分實(shí)驗(yàn)代做服務(wù)

ELISA試劑盒免費(fèi)代檢測

CCK8檢測

基因組DNA提取

 

蛋白相互作用分析

Western Blot

 

免疫組化

熒光定量PCR

動(dòng)物模型服務(wù)

流式細(xì)胞檢測

細(xì)胞增殖

激光共聚焦

DNA甲基化實(shí)驗(yàn)

細(xì)胞劃痕

鈣離子濃度檢測

掃描電鏡實(shí)驗(yàn)

microRNA 測序

動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

Taqman探針

ATP/ADP檢測

 

石蠟/冰凍切片

定點(diǎn)突變

線粒體膜電位(MMP)檢測

細(xì)胞生長曲線的測定

藥理毒理動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

 

免疫共沉淀

真核表達(dá)載體構(gòu)建

染色質(zhì)免疫沉淀CHIP

非標(biāo)定量(Label-free)實(shí)驗(yàn)

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